无胸腺裸鼠的生存条件

目前繁殖裸鼠不用nu/nu雌鼠，因其繁殖性能低，一般采用杂合子**方式或隐性纯合子雄性与杂合子雌鼠**。这种**方法，其后代将出现表现型正常的仔鼠和裸鼠，比例为1：1。繁殖时一般将nu基因导入c57bl/10小鼠中。在把基因导入同源（cogenic）品系时，一般用雌性c57bl/10与雄性c57bl/10-nu（远交株）杂交。其**方法和结果如下：
北京**品检定所繁殖裸鼠用的鼠种是balb/c-nu/nu，系1973年从丹麦引入日本中央实验动物所研究。继续培育三年后，交由日本clea株式会社进行生产。1980年由clea引入。雄鼠是无胸腺裸鼠（balb/c-nu/nu），雌鼠是有胸腺的杂合小鼠（balb/c-nu/）。采用balb/c-nu/♀与balb/c-nu/nu♂随机**法进行繁殖，已取得较好成果，裸鼠的生产性能良好：受胎率达81.5%，平均产仔率8.1只/窝，平均产裸仔率3.99只/窝，窝平均仔鼠成活3.62只，9周龄仔鼠成活率100%，其主要项目数据与日本中央实验动物研究所（clea）和英国实验动物中心（lac）发表的材料基本一致。因为裸鼠缺乏t细胞，易受细菌、病毒和霉菌感染的损害，如按常规动物方式饲养，只有少数裸鼠能生存一个月以上，最多不超过四个月，而放在隔离器（**olator）中饲料的可存活一年以上。因此，裸鼠的寿命与饲料的卫生条件有密切的关系。一般是先在隔离器中繁殖。然后放入无特定病原体屏障环境中饲料。无病原体条件的饲料需要在动物和外界之间装置一个屏障，屏障越严，饲料健康裸鼠就越有保证，然而，如不注意选择屏障的类型，它的效果就没有保证，故应持续检查是否符合条件。1．无病原条件饲料裸鼠设备
⑴带有密封空气过滤装置的塑料笼。每一笼自为一个单元。它包括一个标准的透明塑料笼，笼盖上覆有空气过滤材料。后者与笼子的贴近处用胶带缠绕数周予以密封。然后，此笼可置于一般实验室的标准笼架上。过滤材料呈片状，由疏纺的（但非纺织的）聚酯纤维制成。它应该能够防止微生物从笼外进入笼内。全套笼具皆经高压蒸汽灭菌。使用它和喂养管理（如加饮水和饲料、清笼、断奶等）时，都必须在一个防护罩内进行。罩内所含有的是正压过滤空气。而且还是层流（无湍流的）、单向的。上述的用具有操作方式是存养无致病原动物最简单的方法。⑵动物隔离器。最常使用的此种**有系由柔软片状的透明聚**塑料制成，但也可用有机玻璃、不锈钢、铝皮和尼龙等材料来作。市售成品有一定规格，也可专门根据需要来设计大小，这是一个无菌的生活小室，可排除任何微生物。室气进出该器都经过滤。全部食品和用品都经灭菌后，再经一个无菌的入口小室送入器内，可排除任何微生物。最初，选用化学灭菌剂和高压蒸气对该器进行灭菌处理。在无菌环境中，遗传学背景相同的裸小鼠和通常的杂合子型小鼠寿命长短相近。但是，poiley氏等（1974）发现，在这种环境中，新生小鼠的存活率，较之在普遍环境中的为低。为了使它们胃肠道的功能更接近于正常，有人提议给无菌环境中的裸鼠接种一次非致病的细菌（poliey氏等，1974；eaton等，1975）。这样，常常可以起到改进生殖性能的作用，并有助于把无菌小鼠从隔离器中转移到条件较差的存养设备中去。为了最有效的控制环境，从而得以尽力保存无菌的（或带有一定菌群）**小鼠，隔离器是理想的存养设备。但它也有缺点，这就是费劳力，在一定空间中繁育动物的数量有限。⑶空气层流器。它包括标准的小室，覆罩和网架。每套**形成一个独立的环境，与室内通风系统无关。它自己输入过滤空气，把超净空气完满地注入鼠笼，并以柱状排出。由于每套**互不相干，又有正压空气防护，所以可把它们放在通常条件下。它们是手提式的，既便于维修，又能最大限度地利用房舍和设备。使用此种方法是否成功，取决于管理工作的好坏。密切监视房室的污染和人员流动，只准专职人员入室。应当在正压、单向气流条件下料理维修鼠笼，接触小鼠的一切物品（饲料和其它物品）都必须灭菌。饮水须经处理除去细菌，专职工作者须穿戴无菌的外科口罩、帽子、手套和后长衣，触及动物时须用头端包有橡皮的镊子，而且必须经**（就放在一边）的浸洗。⑷空气层流室。有别于上述的一个房间内放置的小型空气层流器，而是整个房间的环境都为正压过滤空气所笼罩。设计时，须装置空气进入的开关，空气入口要装指示器。工作人员在室内的穿戴同上所述。室内应用的饲料、垫料和笼具的灭菌，须用两端有开关的高压蒸气灭菌器。引种方法可最大限度地利用房舍以繁育动物。虽然装设此种房间的经费昂贵，但是，空气层流室加上严格限制人员的出入，可保证生育期的**小鼠顺利生产，它是大量繁殖裸小鼠的最好方式。举例来说，由于采用它，近五年来（1973～1977），在frederick**研究中心平均每年生产**小鼠在20，000以上。2．环境控制
⑴温度。适于**小鼠的室温为26～28℃（78～820f），**小鼠无毛、其散失体温较有毛小鼠为快。处于连续空气层流中，它们的散热更快，需要大约28℃（800f）的室温予以补偿。一般饲料室内温度控制在25℃±1℃也可以。如果裸鼠和有毛杂合子鼠同笼饲养时室温可略低一点。饲料在在连续空气层流室中的裸鼠需要将层流室内温度提高到28℃。⑵湿度。相对温度应保持在40～60%，此时，成年**小鼠皮肤水分散失最少。湿度过低，对新生裸鼠生存不利，这在空气层流环境中尤为重要。⑶通风。一般认为，每小时需要通风换气10～15次，要用高效过滤器（99.9%）保证良好的空气过滤，除尽空气中大于0.3μm的颗粒。空气出口也有过滤装置（也可以用效能上较低的）以防止空气倒流时的污染，而且要先设计好怎样从室外维修这些过滤器。在空气层流室内，空气的正压至少为0.65cmh2o。空气的流向和速度要控制得均匀而自由。过滤的空气连续掠过鼠笼时，奔流于动物环境之中，在理论是一个防止外源性污染的屏障。⑷光照。每日应当维持10小时光照，14小时无光的明暗周期。不用窗户，用人工照明，使全年光照恒定，但应避免过强的荧光灯光照。3．笼具和垫料
培育**小鼠的笼具，笼底面积应当为97平方厘米（15平方寸），高度应为12.7厘米（5寸），应选可耐受高压蒸气灭菌的塑料或不锈钢制作。其造型应当便于重叠，以利灭菌和存贮。透明塑料笼较好，用时不必打开笼盖就要观察动物。笼底要放垫料，不能用网。笼子必须每周清洁一次，或视需要处理，以保证环境清洁、干燥。用去污剂或其它洗涤剂清洗后的笼子或其它物品，必须充分冲洗干净。否则，会刺激**小鼠的皮肤。垫料直接接触**小鼠的皮肤，不能带有刺激性。可选用不带尘土和尖块的硬木屑，研磨过的玉米杆，或用松木刨花。用前都要灭菌，且灭菌后不结成块状才可使用。为**小鼠建巢可用棉花或棉纸。但是，如果垫料有一寸厚，而且室温控制得恰到好处，能使裸鼠感染舒适，一般就不需要垫棉花或棉纸了。4．供食和供水
⑴饲喂。**小鼠的营养需求与其它品系的小鼠相似。所以，任何市售饲料均可使用。食物必须灭菌，可将食物铺成单层后放在小盘中或放在有孔的口袋中，进行高压蒸气灭菌（45分钟，120℃）。灭菌前，不耐热的营养素要加大用量（williams氏等，1968）。另外，可补充全小麦面包和复制牛奶以改进生育能力，并防止同类噬食现象（poiley氏等，1974）。⑵饮水。有时，自来水中含有少量的各种非致病菌（包括锈色假单细胞菌）。为了避免经水源而污染**小鼠种群，有人建议将饮水过氯化达到12～15ppm；或用**酸化饮水，使之ph达到2.5～2.8，都可有效地控制其污染率，特别是假单细胞菌属细菌的污染。如由于高压灭菌而过多地损失维生素则可在饮水中加入复合维生素（例如，每1000ml加入1ml各种维生素），将该混合液通过直径0.2μm微孔薄膜过滤除菌，每平方寸的压力不得超过10磅。维生素混合液及水应适当地进行某些细菌培养的检查，并应隔天更换水瓶，水瓶和饮水管在两次使用之间必须洗涤和消毒。通过饮水供给抗菌素，可消除胃肠道的细菌（van der waaij氏，1966）。并且，这也是一个防止**小鼠在严格的环境控制下可能发生的外源污染的附加措施。我们使用的四种配方如表4-4所示。下列抗菌素很少消化道吸收，每一种配方应每周更换一次，每四周轮换一遍，可减少抗**菌株的出现。假如你一开始就在严格控制的环境中繁育无菌**小鼠，则也可以不必使用抗菌素，因为加用抗生素后在繁育技术上出现差错的可能性也就增加了。5．空气层流室的保养
层流室内从地面到天花板以及设备均需保持无尘和无破碎。每月必须检测室内的无菌情况，每平方米放一个平皿，检查室内空气中的细菌数量。落下菌的检查各国规定不同，除落下菌数目不得超过限度外，并且不能有致病菌存在，否则，需要重新消毒（见下表）。各国层流室落下菌限度的规定
规定单位平板培养基暴露时间（min）培养时间（h）温度落下菌限度（个）日本普通琼脂54837℃美国血琼脂104837℃北京检定所血琼脂304837℃一切可移动的设备最好高压灭菌，不可移动的装置（如墙、地板、天花板等）要用液体酚类消毒剂彻底清洁，消毒应重复进行三次。消毒后房间应密封，48小时后作微生物学污染检测，如检测是阴性，才允许使用。工作人员入内必须穿戴全套灭菌外科手术衣和消毒的长靴。总之，应按生产裸鼠所有的要求进行，否则试验不易获得成功。饲料繁殖裸鼠必须注意的问题：
⑴建立屏障系统是饲料繁殖裸鼠的重要条件。裸鼠先天性胸腺缺失，免疫系统不健全，缺乏对付外来因子的抵抗力，对病原体极易感染，在常规环境中，最多只能生存数月，因此，必须要在无病原隔离饲料环境中饲料。根据我国目前实际情况，尚不能新建更多的高标准的动物实验设施，而改造现有建筑的办法是可行的。改建后的屏障饲养室虽与科技发达**相比是比较简陋的，但基本上达到了屏障系统设施的要求，费用大为降低，也可使裸鼠繁殖工作正常进行。⑵裸鼠繁殖方法最好选用纯合子隐性（nu/nu）雄鼠与杂合子（nu/）雌鼠进行**生产。因为纯合子隐性雄鼠一般能正常生育，其仔代裸鼠和正常仔鼠的比例为1：1；所有正常的仔鼠都是杂合子，当用这些小鼠作实验对照时，就可明显地观察到纯合子与杂合子之间的不同差异。裸鼠繁殖的其它二种方法，均存在一定缺点，如采用杂合子（nu/）雌雄鼠**时，其子代中裸鼠与表现型正常的仔鼠的比例为1：3，所繁殖的裸鼠少，而且繁殖的正常小鼠可能是nu/或+两种基因的小鼠，除非通过育种，否则不易区别。又如采用纯合子隐性（nu/nu）雄鼠和雌鼠**繁殖，虽然所有的子代都是裸鼠，但这种繁育方法不很有效，因为雌裸鼠繁殖力低，同时护理也很困难。⑶仔鼠出生后存活与否，关键在于哺乳，如不注意哺乳则哺乳期裸鼠死亡率很高。主要原因在于同窝哺乳的有杂毛纯合仔鼠发育快，体大健壮，竞争力强，与纯合裸鼠争食母乳而影响纯合裸鼠的发育，以致其消瘦死亡。为了提高裸鼠生长发育速度及存活率，采用纯合裸鼠，杂合仔鼠分别哺乳，并对雌鼠加喂高蛋白、高维生素饲料。⑷为了保持较长期的正常繁殖生长，就必须建立微生物监测方法来控制质量。因裸鼠免疫机能的缺陷，易受微生物、病毒和寄生虫感染，特别是易受小鼠肝炎病毒的感染，一但裸鼠感染上小鼠肝炎，同窝裸鼠会于生后36～134天相继死亡，无一幸免。病鼠肝发生大理石样变化，质较硬，呈黄色、粗造、结节样、边缘不齐。对裸鼠的饲料繁殖威胁很大。在裸鼠的饲料中，常易发生所谓“消耗性综合征”（wasting syndrome）实与裸鼠常见病之一的鼠病毒性肝炎感染有密切关系，用剖腹产可避免此病毒感染。采用微生物的检查方法时，要考虑裸鼠的生理特性，裸鼠属于免疫机能缺陷的动物，鼠肝炎病毒、仙台病毒等感染后，血清中不产生抗体。因此，只能检查同胎杂合仔鼠血清中的抗体情况，或直接分离病原体，或将裸鼠的肝组织接种于杂合仔鼠后，再用血清学方法测定其相应抗体。因此，对裸鼠一些致病性的病毒和台泽氏病原体等的检查方法，主要是检查同胎杂合鼠血清中抗体的产生情况，来判断裸鼠是否被这些病原体所感染。向左转|向右转 20210311