sds-page电泳凝胶中各主要成分的作用?

?小樱桃同学。 2024-09-28 03:51:00
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聚**凝胶电泳简称为page(polyacrylamide gel electrophores**)
  聚丙烯酰氨凝胶电泳,是以聚**凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚**凝胶由单体**和甲叉双**聚合而成,聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以**(ap)为催化剂,以****(temed)为加速剂。在聚合过程中,temed催化**产生自由基,后者引发**单体聚合,同时甲叉双**与**链间产生甲叉键交联,从而形成三维网状结构。
  page根据其有无浓缩效应,分为连续系统和不连续系统两大类,连续系统电泳体系中缓冲液ph值及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场作用下,主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分,ph,凝胶浓度及电位梯度的不连续性,带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应,分子筛效应,还具有浓缩效应,因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由ap催化聚合而成的大孔胶,凝胶缓冲液为ph6.7的tr**-hcl。分离胶是由ap催化聚合而成的小孔胶,凝胶缓冲液为ph8.9 tr**-hcl。电极缓冲液是ph8.3 tr**-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种ph值使不连续体系形成了凝胶孔径、ph值、缓冲液离子成分的不连续性,这是样品浓缩的主要因素。
  sds是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、**结构。而强还原剂如**,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和sds后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和sds结合成蛋白- sds胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。

  浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选tr**/hcl缓冲液,电极液选tr**/甘氨酸。电泳开始后,hcl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成以稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。 20210311
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