引物合成时nmol为1,od为0.2,怎么稀释
肖遥Jy.
2024-12-01 07:58:32
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稀释引物要达到的浓度(pmol/ul)=母液浓度(pmol/ul)×汲取母液的体积(ul)÷(汲取母液的体积(ul)+加水量(ul))
引物一般来的时候是干粉.这种状态能保存最长的时间.
如果用的话要先离心,5分钟(12000转).然后用它上面写的nmol*1000/你的终浓度=你要加的水量
溶解液有te和dd水.te其实就是tr****和edta的混合液.理论上用te保存好,不容易降解.
一般配的时候要先配成储存液(浓度是100umol/l),在配成使用液(浓度是10umol/l).这样的好处是引物不容易降解.
引物忌讳反复冻溶,大家要注意.如果你都配成了使用液就应该分装.使用液放在4度(2/3个月没问题的),储存液放在-20度.
引物稀释很简单,一般装引物的管子上都标有引物的量如3.6nmol/od,可直接往管中加360ul的无菌双蒸水溶解就可以了,在加水之前要先高速离心管子几分钟,加水后要高速漩涡混匀几分钟就可以用了,此时的储存浓度是10umol/l,如果体系是20ul一般加1ul引物(引物的使用浓度最大为10pmol/ul,但一般在0.5-5pmol/ul即可).
引物的浓度设定,不同的人有不同习惯,有的喜欢稀释成100um的,有的习惯于稀释成20um,也有的稀释成10um的.建议稀释成20um的浓度,因为如果你稀释成100um,当你所做pcr的体系不是很大的时候,体积太小了引物就不好加,容易产生误差;如果是稀释成10um,引物浓度过低,容易降解.不过不管你稀释成多大浓度的,最好分装保存,免得反复冻融容易降解. 20210311