pcr技术基本原理

李花花啊 2024-05-15 04:09:27
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pcr定义pcr(polymerasechainreaction)即聚合酶链式反应,是指在dna聚合酶催化下,以母链dna为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板dna互补的子链dna的过程。是一项dna体外合成放大技术,能快速特异地在体外扩增任何目的dna。可用于基因分离**,序列分析,基因表达调控,基因多态性研究等许多方面。pcr技术的基本原理一.pcr反应成分:1.模板dna;2.引物;3.四种;4.dna聚合酶;5.反应缓冲液、mg2等。二.pcr反应基本步骤:1.变性:高温使解离形成单链(94℃,30s)。2.退火:低温下,引物与模板dna互补区结合(55℃,30s)。3.延伸:中温延伸。dna聚合酶催化以引物为起始点的dna链延伸反应(70~72℃,30~60s)1.变性(denaturation):通过加热使模板dna的双链之间的氢键断裂,双链分开而成单链的过程。2.退火(annealling):当温度降低时,引物与模板dna中互补区域结合成杂交分子。3.延伸(extension):dna聚合酶、在dntps、mg2存在下,dna聚合酶催化引物按5’→3’方向延伸,合成出与模板dna链互补的dna子链。以上述三个步骤为一个循环,每一循环的产物均可作为下一个循环的模板,经过n次循环后,目的dna以2n的形式增加。•的基本方法•pcr反应的成分和作用总体积:一般为25μl~100μl(一)无mg2buffer:由纯水、kcl、tr**组 20210311
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