什么是pcr?

、27岁 2024-05-31 09:08:46
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pcr(polymerasechainreaction)即聚合酶链式反应pcr技术的基本原理:该技术是在模板dna、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖dna聚合酶的酶促合成反应。dna聚合酶以单链dna为模板,借助一小段双链dna来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链dna模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。在适宜的温度和环境下,dna聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-oh末端,并以此为起始点,沿模板5´→3´方向延伸,合成一条新的dna互补链。pcr反应的基本成分包括:模板dna(待扩增dna)、引物、4种脱氧核苷酸(dntps)、dna聚合酶和适宜的缓冲液。类似于dna的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。pcr由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板dna的高温变性:模板dna经加热至93℃左右一定时间后,使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板dna与引物的低温退火(复性):模板dna经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板dna单链的互补序列配对结合;③引物的适温延伸:dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下,以dntp为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 20210311
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