简述血球计数板的结构和计数原理?

Nono 2024-11-16 22:21:07

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血球计数板（改良牛鲍计数板）　　用优质厚玻璃制成。每块计数板由h形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，　　将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分　　为9个大方格，每个大格面积为1.0mm.容积为0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线双成25个中　　方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格　　是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。根椐国际标准局（nbs）规定，大方格每边长度允　　许误差为±1%。 [编辑本段]红细胞计数公式　　红细胞数/l=n*25/5*10*10^6*200　　n为：五个中方格的rbc总数　　n*25/5为：中央大方格rbc总数（即：0.1mm（ul）的rbc总数）　　n*25/5*10为：1mm（ul）rbc总数　　n*25/5*10*10^6为：1l的rbc总数　　*200为血液的稀释倍数　　公式简化后：红细胞数/l=n/100*10^12 [编辑本段]测微尺的构造和使用方法　　测微尺分目镜测微尺和物镜测微尺.目镜测微尺用来测量视野中的物体长度;物镜测微尺是标准长度,用来标定目镜测微尺.　　(1)目镜测微尺的构造目镜测微尺是一块圆形玻片,其中央刻有精确的刻度,通常是将5mm划分为50格,实际每格等于100μm.刻度的大小随着使用的目镜和物镜的放大倍数而改变,用前必须用物镜测微尺来标定.　　(2)物镜测微尺的构造物镜测微尺为一块特制的载玻片,其中央有一小圆圈.圆圈内刻有分度,将长1mm的直线等分为100小格,每小格等于10μm. [编辑本段]目镜测微尺的标定　　(1)取下目镜,旋下目镜上的透镜,将目镜测微尺放人目镜的中隔板上,使有刻度的一面朝下,再旋上透镜,并装入镜筒内.　　(2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上,使有刻度的一面朝上,同观察标本一样,使具有刻度的小圆圈位于视野中央.　　(3)先用低倍镜观察,对准焦距,待看清物镜测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行,并使两尺的左边第一条线相重合,再向右寻找两尺的另外一条重合线.(4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数. [编辑本段]计算方式　　(1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数×10/两个重叠刻度间目镜测微尺格数　　(2)以同样方法,分别在不同倍率的物镜下测定测微尺上每格的实际长度.　　(3)如此测定后的目镜测微尺的尺度,仅适用于测定时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数.若更换物镜,目镜的放大倍数时,必须再进行校正标定. [编辑本段]血球计数板的构造和使用　　血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个**.中间的**较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3. 　　计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图. [编辑本段]血球计数板的使用　　以计数酵母菌为例　　(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.　　(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可. 　　(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.　　(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.　　(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数. 　　(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).　　(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数. 　　3.计算公式　　(1)16格×25格的血球计数板计算公式:　　酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×10四次方×稀释倍数　　(2)25格x16格的血球计数板计算公式:　　酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10四次方×稀释倍数　　4.血球计数板的清洁　　血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,**,**等**脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止. 20210311

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