用ttc法测定根系活力的测定中**的含量对实验有何影响

麻城第一自媒体 2024-11-06 07:35:44
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物根系是活跃的吸收器官和合成器官,根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平.本实验练习测定根系活力的方法,为植物营养研究提供依据.一、原理氯化三苯基四氮唑(ttc)是标准氧化电位为80 mv的氧化还原色素,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲 (ttf),如下式:生成的三苯甲 (ttf)比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以ttc被广泛用作酶试验的氢受体,植物根系中脱氢酶所引起的ttc还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、**所抑制.所以ttc还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.二、实验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料水培或砂培小麦、玉米等植物根系.(二)试剂1.**(分析纯).2.次硫酸钠(na2s2o4,分析纯),粉末.3.1%ttc溶液:准确称取ttc 1.0 g,溶于少量水中,定容到100 ml.用时稀释至需要的浓度.4.磷酸缓冲液(1/15 mol/l,ph7.0).5.1 mol/l硫酸:用量筒取比重1.84的**55 ml,边搅拌边加入盛有500 ml蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000 ml.6.0.4 mol/l琥珀酸:称取琥珀酸4.72 g,溶于水中,定容至100 ml即成.(三)仪器设备小烧杯3个,研钵1个,移液管:0.5 ml 1支、10 ml 1支、5 ml 3支,刻度试管6支,分光光度计,分析天平(感量0.1 mg),电子顶载天平(感量0.1 g),温箱,试管架,药勺,石英砂适量,滤纸.三、实验步骤1.定性测定(1)配制反应液 把1% ttc溶液、0.4 mol/l的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合.(2)把根仔细洗净,把地上部分从茎基部切除.将根放入三角瓶中,倒入反应液,以浸没根为度,置37℃左右暗处放1~3 h,以观察着**况,新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色,表明该处有脱氢酶存在.2.定量测定(1)ttc标准曲线的制作 取0.4% ttc溶液0.2 ml放入大试管中,加9.8 ml**,再加少许na2s2o4粉末摇匀,则立即产生红色的ttf.此溶液浓度为每毫升含有ttf 80 μg.分别取此溶液0.25 ml、0.50 ml、1.00 ml、1.50 ml、2.00 ml置10 ml刻度试管中,用**定容至刻度,即得到含ttf 20 μg、40 μg、80 μg、120 μg、160 μg的系列标准溶液,以**作参比,在485 nm波长下测定吸光度,绘制标准曲线.(2)称取根尖样品0.5 g,放入小烧杯中,加入0.4% ttc溶液和磷酸缓冲液(ph7.0)各5 ml,使根充分浸没在溶液内,在37℃下暗保温1~2 h,此后立即加入1 mol/l硫酸2 ml,以停止反应.(与此同时做一空白实验,先加硫酸,再加根样品,37℃下暗保温后不加硫酸,其溶液浓度、操作步骤同上).(3)把根取出,用滤纸吸干水分,放入研钵中,加**3~4 ml,充分研磨,以提出ttf.把红色提取液移入刻度试管,并用少量**把残渣洗涤2~3次,皆移入刻度试管,最后加**使总量为10 ml,用分光光度计在波长485 nm下比色,以空白试验作参比测出吸光度,查标准曲线,即可求出ttc还原量.四、结果计算根系活力= c/(1000*w*h) [mg ttf/(g?h)]式中:c——四氮唑还原量,μg.w——根重,g.h——时间,h. 20210311
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