目前常用的植物蛋白提取方法有哪些?

JoLee❤️ 2024-11-15 11:00:19

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一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入）,准备提取液放在冰上. 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）. 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液,样品制备完成. 蛋白质提取液：300ml 1、1mtr**-hcl（ph8） 45ml 2、**（glycerol）75ml 3、聚乙烯**酮（polyvinylpolypyrrordone）6g 这种方法针对sds-page,垂直板电泳! 二、植物组织蛋白质提取方法 **—**沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清. 3、加入等体积的冰浴**（含0.07%的β-**）,摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时）,然后真空干燥沉淀,备用. 4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准）,可临时保存在4℃待用. 5、用brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用. 药品：提取液：含10%tca和0.07%的β-**的**.裂解液：2.7g尿素0.2gchaps溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml）,使用前再加入1m的dtt65ul/ml. 这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少! 三、组织：肠黏膜目的：western blot检测凋亡相关蛋白的表达应用tripure提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入**：（1.5ml每1mltripure用量）倒转混匀,置室温10min 离心：12000 g,10min,4度,弃上清加入0.3m**胍/95％乙醇：（2ml每1mltripure用量）振荡,置室温20min 离心：7500g,5 min,4度,弃上清重复0.3m**胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇 2ml 充分振荡混匀,置室温20 min 离心：7500g,5min,4度,弃上清吹干沉淀 1％sds溶解沉淀离心：10000g,10min,4度取上清-20度保存（或可直接用于western blot）存在的问题：加入1％sds后沉淀不溶解,还是很大的一块,4度离心后又多了白色沉定,sds结晶?测浓度,含量才1mg/ml左右. 解决：提蛋白试剂盒,另外组织大小适中,要碎,立即加2x buffer,然后煮5－10分钟,效果很好的. 四、植物材料：水稻苗,叶鞘,根 1、200毫克样品置于冰上磨碎 2、加lys** buffer,离心,10000rpm,4度,5min取上清 3、重复离心5min lys** buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40 五、蛋白质样品制备秧苗蛋白质样品的提取按d**ermal等（1986）的方法进行. 100mg材料剪碎后加入10mgpvp-40(聚乙烯**酮)及少量石英砂,用液氮研磨成粉,加入1.5 ml 10% **（**配制,含10mm即0.07%β-**）,混匀,-20℃沉淀1小时,4℃,15000 r/min离心15 min,弃上清,沉淀复溶于1.5ml冷**(含10 mmβ-**),再于-20℃沉淀1小时,同上离心弃上清,（有必要再用80％**(含10 mmβ-**所得沉淀低温冷冻真空抽干. 按每mg干粉加入20μl（可调） uks液[9.5 m尿素,5mm碳酸钾,1.25%sds,0.5%dtt(二硫苏糖醇),2% ampholine (amersham pharmacia biotech inc,ph3.5-10),6% triton x-100],37℃温育30min,期间搅动几次,28度（温度低,高浓度的尿素会让溶液结冰）16000 r/min离心15 min,离心力越大时间长一点越好!上清即可上样电泳.或者-70度保存六、植物根中蛋白质的抽取 (1) sample,液氮研磨 (2) 装1.5 ml centrifuge 用tube (3) 加 1m kh2po4 k2hpo4 700 ul (4) 12000 rpm,4度,10-15minite (5) 取上层液,蛋白质就在里面 20210311

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